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发布时间：2022-04-20 22:59
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时间：2023-10-04 16:35
慢病毒（Lentivirus） 载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。
特点：
1、区别一般的逆转录病毒载体，它对*细胞和非*细胞均具有感染能力，常用于感染难转染的细胞，如原代细胞、神经元细胞、干细胞、不分化细胞、心肌细胞、肝细胞、内皮细胞、肿瘤细胞，且效率近100%
2、可装载DN*段容量高达5kb
3、目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，形成稳定遗传物质，使得目的基因在细胞中可稳定长期表达。
4、病毒载体颗粒通过包装元件和含病毒基因组质粒共转染包装细胞系。利用逆转录机制构建自我失活(SIV)的HIV-1来源的载体,一旦转移到靶细胞后,它就丧失了病毒长末端重复的转录能力,减少了产生重组病毒的机会,并避免了与启动子干扰的问题。
5、目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个，即gag、pol、rev。由于HIV-1基因组成分中60 %被去除,因此父代病毒无法复制，是目前重组系数最低的一个慢病毒包装系统，至今未见重组报道。其更安全、更稳定、更高效的技术优势领先于市场上的三质粒及其他包装系统。
综上特点决定了其应用、意义：
1、用慢病毒载体携带目的基因比用质粒瞬时转染更适于稳转株构建。
2、载体带有可进行高效率的包装、转染并稳定整合进靶细胞的基因组中的序列元件，其产生滴度更高，为活体动物模型实验提供高性价比的包含目的基因的病毒液。
3、其高转导效率及整合到基因组的特点为RNAi,cDNA 克隆以及报告基因的研究提供了一个有利的途径。
作为快速有效的遗传物质投递工具，慢病毒在国内已广泛流行，更有众多包装服务公司兴起。同时，克服了对病毒的恐惧心理而选择自己包装的研究者也陆续增加。外包服务和DIY（Do It Yourself）相比，后者成本会大大降低。仅需买一个包装试剂盒、构建一个慢病毒载体即可进行实验。GeneCopoeia公司提供了一款基于第三代包装系统的包装试剂盒。试剂盒中包含除慢病毒基础载体和包装细胞外的其他所有成分：包装辅助质粒混合物，滴度增强剂，慢病毒专用转染试剂（EndoFectin Lenti），eGFP阳性对照质粒。
慢病毒包装实验步骤与注意事项： 材料准备：包装试剂盒、病毒质粒、细胞；（注意事项：包装试剂盒的使用遵照说明书。检测病毒质粒浓度，确保DNA的OD(260nm/280nm)处于1.8-2.0之间，并电泳检测质粒是否完整。包装实验前准备好细胞，保证细胞状态良好。） 制备DNA/转染试剂复合物：此步骤比较简单，仅需按照试剂盒说明书操作。 转染工具细胞：通常使用293Ta细胞，将DNA-Endofectin Lenti复合物加入到装有包装细胞的培养板中。在37℃、CO2环境下过夜培养（8-14小时），谨记培养6小时更换一次培养基，加入滴度增强剂TiterBoost，可增强滴度5-10倍。 收获病毒：收集转染48小时后的培养液，500 *g离心10分钟，去除细胞碎片杂质。接着用0.45 μm的
聚醚砜蛋白结合过滤膜去除蛋白等杂质。收获纯度较高的病毒。 检测滴度。