彗星实验( COmet assay)

发布网友 发布时间：2024-10-24 11:21

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热心网友 时间：2024-10-25 23:42

实验部分主要包含准备单细胞悬浮液、制备琼脂糖混合物、涂布载玻片、裂解细胞并加入碱性溶液、电泳处理和最后的乙醇处理及荧光染色。

具体流程如下：首先，在37℃下制备单细胞悬浮液，然后将悬浮液与低熔点琼脂糖混合，接着将混合物涂布在预处理的载玻片上。在4℃条件下，使用裂解液处理30-60分钟，随后加入碱性溶液。接着，载玻片被放入电泳溶液中进行凝胶电泳。电泳缓冲液有两种选择，即碱性溶液和TBE，其中碱性溶液更敏感。电泳处理完成后，载玻片用70%乙醇处理，待LM琼脂糖完全干燥。干燥后，使用荧光染料对载玻片进行染色，并在荧光显微镜下观察DNA损伤情况。

分析部分则通过测量彗核与遗传物质之间的位移来量化DNA损伤。分析结果通常涉及尾矩和尾DNA%这两个参数，用于评估DNA损伤程度。通常，每个样本至少需要分析50-100个细胞。考虑到遗传物质的迁移和尾部DNA的相对含量，尾矩被视为一个合适的DNA损伤指标。

在分析软件方面，主要有三种选择：OpenComet、CaspLab（CASP）和Comet Assay IV。其中，OpenComet因其免费、便捷且省事的特点，成为一种受欢迎的选择。